常溫運(yùn)輸過程中,細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響,出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。遇到這種情況,不用緊張,只要正確處理,細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長。
收貨時(shí)皺縮
常溫細(xì)胞收貨后,把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒有鋪展開,密度適中的前提下可以靜置過夜(過夜前倒出部分培養(yǎng)基,留5-10mL在瓶中,瓶蓋擰松)。
收貨時(shí)聚團(tuán)
常溫細(xì)胞收貨后,先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài),再進(jìn)行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收貨時(shí)脫落
常溫細(xì)胞收貨后,先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。脫落后的細(xì)胞通常聚團(tuán)漂浮,通過離心將漂浮的細(xì)胞團(tuán)收集起來,在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。
貼壁細(xì)胞常規(guī)方法消化下來,和處理好的脫落細(xì)胞合并,混勻后鋪板。
SH-SY5Y脫落處理步驟:
1. 1200rpm(約250g)3min離心收集細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)基;
2. PBS 重懸細(xì)胞,再次 1200rpm(約250g)3min離心,去除PBS;
3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重懸細(xì)胞,吹打1-2下吹起沉淀即可;
4. 放入細(xì)胞培養(yǎng)箱約 1-3min;
5. 用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散;
6. 迅速加入 3-5mL含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化;
7. 1200rpm(約250g)3min離心,去除胰酶;
8. 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無菌培養(yǎng)器皿中;
SH-SY5Y細(xì)胞收貨時(shí)皺縮、脫落
SH-SY5Y細(xì)胞處理后第三天