在普諾賽3月30日開播的細(xì)胞培養(yǎng)直播課堂中，有很多同學(xué)提出各種疑問。我們篩選出具有代表性的問題，并作了詳細(xì)解答。
01 動物細(xì)胞怎么鑒定？
要根據(jù)實驗的目的以及細(xì)胞類型進行選擇。如果是人源細(xì)胞系，并且有文獻或數(shù)據(jù)庫公布對應(yīng)細(xì)胞信息，則進行STR鑒定即可；如果使非人源的細(xì)胞系，可以進行種屬鑒定，并且附加一個研究方向相關(guān)的指標(biāo)進行驗證，部分小鼠細(xì)胞也可以做STR鑒定，但目前數(shù)據(jù)庫不*，很多都沒有匹配數(shù)據(jù)。對于原代細(xì)胞，如果能夠確保取材無誤，僅進行特異性指標(biāo)方面的檢測就可以了，方法可采用免疫熒光、流式檢測、WB檢測等。
02 發(fā)表高水平文章時，需要提供哪些文件呢？COA？STR？
目前*的細(xì)胞鑒定文件為STR鑒定，對于不適用STR鑒定方法的細(xì)胞，可以根據(jù)自己的研究方向?qū)?xì)胞進行驗證，方法沒有限制，一些新的技術(shù)和方法的應(yīng)用能夠一定程度上提高文章的檔次。
03 原代細(xì)胞和細(xì)胞系有啥區(qū)別？
主要是傳代次數(shù)上的差異。原代細(xì)胞一般指從動物組織直接提取的細(xì)胞，而細(xì)胞系是在原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上經(jīng)過傳代和篩選得到。另外常用的細(xì)胞系，都是經(jīng)過篩選得到的穩(wěn)定細(xì)胞群體，特性在進行連續(xù)性實驗時能夠保證結(jié)果更加穩(wěn)定，而原代細(xì)胞的優(yōu)勢則在于與機體細(xì)胞特征更加接近。
04 pc12細(xì)胞高分化后，多次傳代會影響實驗結(jié)果嗎？
PC-12（高分化）細(xì)胞是穩(wěn)定的細(xì)胞系，正常傳代不會改變細(xì)胞特性，但是傳代過程中如果出現(xiàn)生長過度、污染等異常情況可能會導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生變化，所以建議在低代次時凍存保種。若是自行誘導(dǎo)建系的高分化PC-12細(xì)胞，則要看誘導(dǎo)后得到的細(xì)胞特性是否穩(wěn)定，一般也是建議在細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定時凍存，避免后續(xù)長期傳代培養(yǎng)過程中出現(xiàn)意外。
05 H22的STR為啥和NIH/3T3的STR基本相似？
首先要明確一點，H22和NIH/3T3兩株細(xì)胞在特性上差異較大，混淆的概率非常小，而STR位點數(shù)據(jù)相似，可能是由于這兩株細(xì)胞本身親緣關(guān)系非常接近。由于很多品種的小鼠都是近交品系，同種小鼠本身親緣關(guān)系就比較近，這就有可能導(dǎo)致不同的小鼠細(xì)胞會出現(xiàn)位點接近的情況，這也是目前小鼠STR沒有廣泛應(yīng)用的原因之一。
06 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞也需要自己鑒定吧？
做細(xì)胞鑒定需要先明確鑒定的目的。如果自己提取的腫瘤細(xì)胞或者癌旁的成纖維細(xì)胞，可以用免疫學(xué)的方法去確定得到的細(xì)胞是屬于什么類型。
07 ATCC為什么看不到HSC？
HSC細(xì)胞從名稱上來看應(yīng)該是原代提取細(xì)胞的簡稱，或者是簡寫的名稱，并沒有寫全。通用的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系中，沒有HSC這株細(xì)胞的信息。另外，ATCC并沒有收錄所有種類的細(xì)胞系，很多國內(nèi)建系的細(xì)胞也無法查到，可以參考PPT中講到的查詢方法，多查幾個細(xì)胞庫的資源看看。
（如需PPT視頻，請移步普諾賽，直線聯(lián)系各區(qū)*）
08 細(xì)胞系具有無限增殖的能力，正常的細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞系之后，那不是很多蛋白的表達(dá)都改變了，做蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析的不是就不準(zhǔn)了嗎？
細(xì)胞系具有無限增殖的能力，同時它的另一個要求是穩(wěn)定傳代。如果是在培養(yǎng)中或者經(jīng)過篩選得到另外一種特性的細(xì)胞，則可以定義為一株新的細(xì)胞系；如表達(dá)/不表達(dá)某某蛋白的細(xì)胞，在不經(jīng)過特殊處理的情況下，傳代過程中細(xì)胞發(fā)生變異的概率極低。培養(yǎng)條件不改變的情況下，短期內(nèi)不需要擔(dān)心蛋白表達(dá)發(fā)生變化。
09 BGC胃癌細(xì)胞是不是也是污染了？
如果指的是BGC-823細(xì)胞，這株細(xì)胞確實是建系時被Hela污染的，相關(guān)信息可以在Expasy網(wǎng)站上查到。
10 在肺泡灌洗液找到了一組細(xì)胞，但是我們想鑒定一下到底是什么細(xì)胞，有什么辦法嗎？
先推斷可能的細(xì)胞種類，再根據(jù)這些種類選擇對應(yīng)的指標(biāo)進行鑒定。如肺泡灌洗液中最可能出現(xiàn)的就是巨噬細(xì)胞或脫落的上皮細(xì)胞，根據(jù)這些種類細(xì)胞的指標(biāo)進行鑒定即可。
11 雞細(xì)胞怎么做鑒定？
確定雞的種屬可以用PCR法，設(shè)計種屬特異性的引物進行鑒定；要確定細(xì)胞的類型可以用免疫學(xué)的方法，選擇對應(yīng)的抗體進行鑒定。
12 從小鼠原代細(xì)胞系中制備可以傳代的細(xì)胞系怎樣最快？
從原代培養(yǎng)的細(xì)胞建立細(xì)胞系，可以通過病毒基因轉(zhuǎn)染、端粒酶激活等方法。
13 對細(xì)胞系進行轉(zhuǎn)染質(zhì)粒敲除，敲除后的細(xì)胞系可以繼續(xù)傳代嗎？
有文獻研究表明，即使敲除了永生化過程中導(dǎo)入的相關(guān)基因后，細(xì)胞不會停止繼續(xù)增殖的情況，反而在細(xì)胞特異性分化、分泌代謝等方面趨于成熟。也就是說，即使敲除了轉(zhuǎn)染的基因，細(xì)胞系也可以繼續(xù)傳代。
4月直播課堂將于4月28日開播，記得關(guān)注普諾賽公眾號哦~
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